ABSTRACT
A investigação de culturas mistas de micobactérias é importante pois geralmente estas incluem ao menosuma espécie patogênica ou potencialmente patogênica. Dentre 8.036 culturas recebidas entre 1999 e 2000,pelo Setor de Micobactérias do Instituto Adolfo Lutz, foram selecionadas 21 (0,26%) com resultados sugestivos de culturas mistas. Após o isolamento em meio 7H11 as colônias foram repicadas em Lõwenstein Jensen e incubadas à 37° C. A identificação dos 32 subcultivos foi feita por métodos fenotípicos e pela analise do perfil de restrição do produto da amplificação de 440 pares de base do gene hsp65. Em oito subcultivos foi encontrada a espécie M. tuberculosis associada com MNT, em 3 subcultivos foramencontradas 2 espécies de MNT e nos demais foi identificado apenas um tipo de micobacteria. O tempo decrescimento lento das micobactérias inviabiliza o plaqueamento de todas as culturas pois este procedimentoacarretaria demora na liberação do resultado final dos testes, além de representar gastos excessivos em áreas endêmicas, geralmente com escassos recursos econômicos. Embora as dificuldades mencionadas, os microbiologistas devem estar atentos quanto à presença de culturas mistas de micobactérias e usar todos os métodos disponíveis para separar e identificar as espécies
Subject(s)
Culture Media , Mycobacterium tuberculosisABSTRACT
As micobactérias de crescimento rápido anteriormente classificadas como complexo micobacterium fourtuitum foram recentemente designadas M.fortuitum, M. peregrinum, M. chenonae e M. abcessus. A identificaçäo dessas micobactérias é importante para estabelecer a terapêutica adequada, visto que possuem diferentes padröes de resistência às drogas. Dentre 3.441 culturas de micobactérias recebidas em 1999 no Setor de micobactérias do Instituto Adolfo Lutz, foram selecionadas 13 cepas, classificadas como complexo M. fortuitum. O estudo incluiu o isolamento das colônias para certificar-se da pureza das culturas, a adiçäo de testes com carboidratos e citrato de sódio que separam as quatro espécies citadas e o uso da técnica de PCR restriction analysis do gene hsp65 (PRA) para elucidaçäo de resultados duvidosos dos tstes fetípicos. Na análise das 13 culturas, observou-se que oito apresentaram dois tipos de colônias (lisa e rugosa) e as cinco restantes apenas um tipo. As identificaçöes feitas com a técnica de PRA e c om os testes fenotípicos foram concordantes na maioria das cepas. Os resultados desse estudo de referência e implementada com testes específicos para cada espécie, que possibilitem a elucidaçäo rápida do diagnóstico
The rapidly growing mycobacteria, previously classified as Mycobacterium fortuitumcomplex, has recently been designated M. fortuitum, M. peregrinum, M. chelonae and M. abscessus. Theidentification of these mycobacteria is important for establishing the proper treatment, because they havedifferent patterns to drugs. Among 3,441 cultures of mycobacteria received in 1999 by the MycobacteriaLaboratory of the Adolfo Lutz Institute, 13 cultures classified as M. fortuitum complex were selected to bestudied. The study included isolation of colonies in order to ensure the purity of the cultures, the additionof tests with carbohydrate and citrate, which differentiate the four previously mentioned species and theuse of the PCR restriction analysis of hsp65 (PRA) for the analysis of dubious results in conventionaltests. In the analysis of the 13 cultures, it was observed that eight showed two types of colonies (smoothand rough) and the remaining five showed only one type. The identification by PRA technique and byconventional tests agreed to the majority of the strains. The results of this study suggest that theidentification of mycobacteria, due to its complexity, should be centralized in Reference Laboratories andimplemented with specific tests for each specie in order to give a rapid diagnosis
Subject(s)
Phenotype , Polymerase Chain Reaction , Mycobacterium chelonae , Mycobacterium fortuitumABSTRACT
A técnica de microdiluiçäo em placa, para determinaçäo da concentraçäo inibitória mínima, foi comparada com as técnicas de macrodiluiçäo em tubo radiométrica. A padronizaçäo da microtécnica visou sua utlizaçäo em ensaios de drogas alternativas e novos compostos com potencial açäo antimicrobiana contra o Mycobacterium tuberculosis. A droga utilizada, foi testada na cepa padräo H37Ra e em 34 cepas de teste, sendo 26 sensíveis a isoniazida e oito resistentes, segundo perfil de sensibilidade determinado pelo método da taxa de resistência. A comparaçäo entre os métodos em placa e o radiométrico resultou na concordância de 32 cepas de discordância de três. Estes dados indicam que o método de microdiluiçäo em placa é adequado para se testar o efeito de drogas ou compostos químicos sobre o M. tuberculosis. A técnica é econômica, de fácil execuçäo e näo requer equipamento para sua execuçäo. (AU)
The microtitre plate method used to determine the minimal inhibitory concentration has beencompared with the method of tube macrodilution and the radiometric method, for the purpose of evaluatingthis method in testing second-line drugs and new compounds which may have a potential effect againstMycobacterium tuberculosis. The drug used was isoniazid and 34 strains were tested, besides the standardstrain H37Ra. Out of those strains, 26 were sensitive to isoniazid and eight were resistant to it. The resultsobtained showed that the plate method gave 32 concordant results and three discordant ones. There wasa good correlation between the results of these methods and the results of the radiometric method. Thesensitivity and specificity of this method were good, being very similar to the ones for the radiometricmethod. The conclusion is that the microdilution plate method is appropriate to test the effect of drugs or compounds against M.tuberculosis. It is an inexpensive technique that is easy to perform and does notrequire any equipment in its use. (AU)